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绪论 1、什么是微生物(Microorganism, microbe) 2、微生物的共性 3、微生物学发展简史
Chap 5 微生物的代谢和发酵
1、新陈代谢(metabolism) 2、分解代谢与合成代谢的联系与调节
3、大分子营养物质的降解
§1 微生物的产能代谢§2 微生物的合成代谢§3 微生物的代谢调控与发酵生产
Chap 6 微生物的代谢和发酵
1、新陈代谢(metabolism)
●概念:新陈代谢简称代谢,包括分解代谢和合成代谢。
分解代谢(catabolism)/异化作用(dissimilation)/产能代谢(energy-yielding metabolism);
合成代谢(anabolism)/同化作用(assimilation)/耗能代谢 (energy-expended metabolism)。
2、分解代谢与合成代谢的联系与调节
●联系:十分不同、紧密联系、伴同发生的两个过程。
●调节:最基本方式为调节代谢流(酶活性调节和酶合成调节)。
此外,营养物质运送、酶的定位等调节。
3、大分子营养物质的降解
●淀粉:α-淀粉酶(芽孢杆菌属、曲霉属),β-淀粉酶(多粘芽孢杆菌,根霉),淀粉葡萄糖酶(黑曲霉、米曲霉),异淀粉酶(黑曲霉、米曲霉)。
●纤维素:纤维素酶(木霉、纤维单孢菌、纤维素放线菌)。
天然纤维素(c1酶)-水合非结晶纤维素(CX1、CX2 酶)-纤维二糖+葡萄糖(纤维二糖酶)——葡萄糖
●果胶质:细菌(芽孢杆菌、假单胞菌)、真菌(青霉、曲霉、 根霉)。
天然果胶质(原果胶酶)-水可溶性果胶(果胶甲酯水解酶)-果胶酸(果胶酸酶)-半乳糖醛——糖代谢途径
●几丁质:细菌(梭菌病、芽孢杆菌病)、放线菌。
甲壳素(甲壳素酶)甲壳=糖(甲壳=糖酶)N-乙酰氨基葡萄糖
●脂肪(脂酶):微生物种类较少,真菌以及霉菌
脂肪——甘油(糖酵解、TCA循环)各种中间产物、能量
——脂肪酸(β-氧化)乙酰COA——TCA循环/乙醛酸循环
●蛋白质:霉菌、细菌。
蛋白质(蛋白质)——肽(肽酶)——氨基酸
●内源代谢:贮存物质耗尽之后,利用细胞蛋白质和RNA作为能源。
§1. 微生物的产能代谢
I 、能量来自有机物--化能异养微生物的生物氧化与产能
●微生物生命活动所需的能量来源:氧化有机物(化能异养菌)、氧化还原态的无机物 (化能自养菌)、来自日光辐射能(光能营养菌)。
●生物氧化:定义、形式(氧结合、脱氢、失电子)、阶段。
●通用能源:ATP,跨膜质子电化学梯度
(△H)/质子动势。
一、单糖的分解代谢(以葡萄糖为例)
●葡萄糖分解代谢(氧化脱氢)途径。
1、EMP途径(Embdem-Meyerhof-Parnas Pathway)
● EMP途径的简图
● EMP途径的主要产物
● ATP和NADH的生成:位置、数量,底物水平磷酸化。
●总反应式:葡萄糖+2ADP+2NADT+2PI--2丙酮酸+2ATP+2NADH+2H+
●EMP途径的生理功能
2、HMP途径(hexose monophosphate pathway)
(1)特点:
●HMP途径又称已糖单磷酸途径,是在单磷酸已糖基础上开始降解。
●三种 戊糖相互转化。
● C4、C7(芳香族氨基酸前体)和C5(核酸前体)的生成。
●产生大量NADPH2形式的还原剂。
(2)总反应式:6葡-6-磷酸+12NADP+6H2O →5葡糖- 6磷酸+12NADPH+12H+12CO2+pi
(3)HMP途径的生理功能
3、ED途径(Enter-Doudoroff pathway)
●反应细节
●关键酶及关键反应
●主要产物(ATP、NADH、NADPH的生成数量)
4、三种途径比较(见下图)
●存在 :
EMP、HMP是微生物降解葡萄糖的主要途径,二者在同一种微生物中往往同时存在,但在代谢的作用中的比例不同,ED途径存在嗜糖假单胞菌和运动发酵单胞菌等细菌。
●关键酶
产能效率:EMP(2ATP/葡糖)、ED (1ATP/葡糖)
●还原力的产生:EMP
(2NADH2),ED(1NADH2+1NADPH2)、HMP (12NADPH2)
二、丙酮酸代谢
1、概述
●单糖经不同途径降解,产生丙酮酸和同化力[NAD(P)H2、ATP],产物的去向取决不同微生物及不同培养条件。
●大多数好气和兼性好气性微生物,在有氧情况下:TCA循环,电子传递磷酸化、呼吸作用(respiration)。
●一些厌气菌和兼性好气菌,在无氧条件下,无氧呼吸。(anaerobic respiration)
●大多数厌气和兼性厌气有机化能营养微生物,在无氧条件下:发酵作用(fermentation)
2、三羧酸循环(tricarboxylic acid cycle)
●反应部位:真核微生物(线粒体基质)、原核微生物(细胞质)
●反应历程:能量的产生(15个ATP/丙酮酸)。
●TCA循环的意义:枢纽地位,有机酸、谷氨酸 发酵。
三、生物氧化中递氢和受氢
●依据受氢体性质不同,生物氧化分:有氧呼吸、无氧呼吸和发酵三种类型。
1、有氧呼吸(respiration)
●定义:呼吸链、最终受氢体(O2)。
●呼吸链(respiratorychain,RC)/电子传递链(electrontransport chain,ETC)
●氧化磷酸化机理与效率:化学渗透学说(chemiosmotic hypothesis)、 P/O比(molTAP/mol氧原子)。
2、无氧呼吸(anaerobic respiration)
●定义:最终受氢体为外源无机氧化物(个别是延胡索酸)
●类型:硝酸 盐 呼 吸(nitrate respiration)/反 硝 化 作 用(denitrification)
硫酸盐呼吸(sulfate respiration)、延胡索酸呼吸(fumarate respiration)
碳酸盐呼吸(carbanate respiration)、硫呼吸(sulphur respiration)
3、发酵(fermentation)
●定义:发酵工业、微生物生理(代谢)
●主要类型:由EMP途径中丙酮酸出发的发酵(6种类型)
通过HMP途径的发酵(异型乳酸发酵,肠膜状明患珠菌)
通过ED途径的发酵(细菌酒精发酵)
氨基酸发酵产能(Stickland反应)
● 发酵中的产能反应:底物水平磷酸化,高能磷酸化
合物,乙酰磷酸产能是厌氧微生物产能的主要方式。
II、能量来自无机物--化能自养菌的生物氧化与产物
1、概述
●两类自养菌还原CO2所需能量和还原力的来源不同。
●化能自养菌还原CO2时ATP和[H]的来源。
●微生物生理特性及种类:多数好氧性、少数兼性厌
氧、种类有硝化细菌、硫细菌、氢细菌、铁细菌等。
2、化能自养菌氧化产能的特点:
●还原性无机物氧化直接与
呼吸链相联。其过程比异养菌(经EMP/TCA等)简单。
●呼吸链的组分多样化。
●主要通过电子传递磷酸化产能、少数硫杆菌(氧
化亚铁硫杆菌)也能部分地进行底物水平磷酸
化产能。产能效率(P/O)比异养菌低。
3、列举:硝化细菌的能量代谢。
III、能量来自光能--光能自养菌的产能代谢
1、循环式光合磷酸化(cyclic photophosphorylation)
特点 过程:
●存在:光合细菌[着色菌属 (chromatium)、
红螺菌属 (Rhodospirillum)、绿菌属 (Chlorobium) 等18属]
2、非循环式光合磷酸化(noncyclic photophosphorylation)
●过程:●特点:
●存在:绿色植物、藻类、蓝细菌。
3、嗜盐菌紫膜的光合作用
●过程: ●机理(细菌视紫红质、质子泵、△P、化学渗透学说)
●存在:盐生盐杆菌(Halobacterium halobium),红皮盐杆菌(H.cutirubrum)
§2、微生物的合成代谢
●合成代谢(anabolism)/同化作用(assimilaton)耗能代谢(energy-expended metabelism)
一、微生和的合成代谢的特点
●微生物合成能力很强、但有种属差异。
●合成途径多样化比分解途径少、主要物质的合成途径比较一致。
●合成代谢条件:能量、还原力、无机物或简单有机物
二、自养微生物的CO2固定
1、Calvin循环(Calvin cycle)
●反应历程:
特征酶及其所催化的反应
●存在:化能自养菌、光能自养菌中蓝细菌和绝大部分光合细菌、藻类、绝色植物。
2、厌氧乙酰-辅酶A途径
●反应历程 :
●存在:一些能利用氢的严格厌氧菌(产甲烷菌, 硫酸盐还原菌)。
3、还原性TCA循环途径
●关键酶及催化反应:a -酮戊二酸合成酶,催化琥珀酰-CoA+CO2→ a-酮戊二酸
●存在:少数光合细菌(例,嗜硫代硫酸盐绿菌Chlorobium thiosulfatophilum)。
4、三条途径比较:厌氧CO2、固定CO2比好氧更为有效。
三、生物固氮(fixation of molecular nitrogen)
1、定义及其作用:N2还原成NH3的过程,生态平衡、土壤肥力、节约能源避免污染。
2、固氮微生物种类
●自生固氮菌:独立进行固氮的微生物,种类繁多 (生理营养类型)
●共生固氮菌:与它种生物共生才能固氮。
●联合固氮菌:必须生活在水稻、甘蔗、玉米等植 物的根际、叶面或动物肠道等处才能固氮。
3、固氮的生化机制
●总反应式:N2+be+6H++12ATP——2NH3+12ADP+12Pi
● 条件:固氮酶、能量/产能体系、还原力及其载体、还原底物N2、Mg、严格厌氧微环境。
●固氮酶测定方法:微量克氏定氮法、同位素法、乙炔还原法。
●固氮酶组成及其功能●固氮的生化途径●氨的去路
4、好氧性固氮菌固氮酶的抗氧机制
●自生固氮菌:呼吸保护、构象保护
●蓝细菌:异型胞,非异胞蓝细菌(时间分隔、束状群体、过氧化物酶活力)
●根瘤菌:豆科植物共生根瘤菌(类菌体周膜、豆血经蛋白),非豆科植物共生根瘤菌(植物血红蛋白、泡囊)。
四、肽聚糖的合成
●肽聚糖合成的三个阶段和合成部位。
1、在细胞质中的合成。
●由葡萄糖合成N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸。 ●由N-乙酰胞壁酸合成 “park”核苷酸。
2、在细胞膜中的合成:细菌萜醇(bactoprend)/类脂载体、肽聚糖单体(二糖五肽亚单位)。
3、膜外组装:引物(至少含6-8个肽聚糖单体)、转糖基作用 (trans-glycosylation)、转肽酶(transpeptidase)转肽作用。
4、某些抗生素对肽聚糖合成的抑制作用:环丝氨酸、万古霉素、杆菌肽、青霉素。
§3微生物的代谢调控与发酵生产
一、微生物的代谢调节
●酶的合成调节:诱导、阻遏。●酶的活力调节:激活、抑制(反馈抑制)。
二、代谢调控在发酵工业中的应用
●应用营养缺陷型菌株解除正常的反馈调节:赖氨酸发酵、肌苷酸(IMP)的生产。
●应用抗反馈调节的突变株解除反馈调节。
●控制细胞膜的渗透性:生理学手段,细胞膜缺损突变。
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